A cromatografia líquida representa um conjunto de técnicas empregadas na separação, purificação e caracterização de biomoléculas, como proteínas e peptídeos. A escolha da técnica adequada depende tanto das propriedades físico-químicas da molécula-alvo quanto do objetivo experimental, exigindo compreensão detalhada dos princípios de cada abordagem. Sobre as diferentes técnicas de cromatografia líquida, analise as assertivas abaixo:

I. Na cromatografia de fase reversa, compostos apolares são eluídos antes, enquanto os compostos polares ficam retidos na coluna e são eluídos tardiamente, à medida que a proporção de solvente orgânico na fase móvel aumenta.

II. Na cromatografia de troca iônica, o gradiente salino compete com a proteína pelos sítios de ligação.

III. Na cromatografia de gelfiltração, as moléculas maiores são eluídas primeiro, pois não penetram nos poros da matriz.

IV. Na cromatografia de imunoafinidade, a eficiência da recuperação e captura do analito independem das condições de pH.


Quais estão corretas?

Durante a purificação de uma enzima vegetal, o pesquisador aplicou o método de salting-out utilizando sulfato de amônio em diferentes níveis de saturação. Observou-se que, conforme a concentração do sal aumentava, distintas frações proteicas se precipitavam em etapas sucessivas. Com base nos fundamentos desse processo, assinale a alternativa correta.

A ubiquitina é uma pequena proteína altamente conservada nos eucariotos, cuja conjugação a outras proteínas desempenha papel central na regulação de diversos processos celulares, incluindo controle do ciclo celular, resposta ao estresse e turnover proteico. Seu acoplamento é mediado por uma cascata enzimática específica e pode resultar em diferentes destinos funcionais para a proteína-alvo. Com base nas funções conhecidas da ubiquitinação, assinale a alternativa correta.

Durante o enovelamento de uma proteína, diferentes interações estabilizam os níveis estruturais da molécula. As pontes de hidrogênio formadas entre o oxigênio da carbonila e o hidrogênio da amida da cadeia principal do polipeptídeo são responsáveis diretamente por

Durante a repressão transcricional em eucariotos, a regulação da cromatina desempenha papel central na modulação da acessibilidade do DNA à maquinaria de transcrição. Diversos complexos podem interagir com fatores de transcrição, alterando o estado estrutural da cromatina e interferindo na expressão gênica. Sobre o tema, assinale a alternativa correta.

Durante um ensaio de expressão gênica, uma pesquisadora utilizou um sistema repórter de luciferase para avaliar a atividade transcricional do promotor do gene CDKN1A em uma linhagem de fibroblastos humanos. O gene CDKN1A é regulado pelo fator de transcrição TP53, que se ativa em resposta a danos no DNA, promovendo a parada do ciclo celular. As células foram tratadas com doxorrubicina, um agente genotóxico conhecido por induzir fosforilação e ativação de TP53. Após 12 horas, observou-se um aumento significativo da luminescência em relação às amostras controle. Com base nessas observações e no funcionamento do sistema repórter, é correto afirmar que:

A fim de introduzir uma mutação pontual no gene OsSPL14, envolvido no controle do perfilhamento e rendimento de grãos, em uma espécie de arroz, pesquisadores utilizaram o sistema CRISPR-Cas9. Após a clivagem da dupla fita de DNA, foram observados dois tipos distintos de eventos: mutações do tipo inserção/deleção e correções precisas da sequência-alvo. Com base nos mecanismos moleculares de reparo de DNA induzidos por Cas9, assinale a alternativa correta sobre a diferença entre NHEJ e HDR.

A fim de compreender os mecanismos genéticos associados à altura e ao alongamento do caule em uma determinada população de Arabidopsis thaliana adaptada a temperaturas mais elevadas, pesquisadores estão estudando o papel do gene AtGA20ox1, utilizando o sistema CRISPR-Cas9. Durante o planejamento do desenho experimental, os pesquisadores observaram a necessidade da presença de uma pequena sequência adjacente ao alvo, denominada protospacer adjacent motif (PAM). No contexto do CRISPR-Cas9, assinale a alternativa correta sobre a sequência PAM.

Durante um estudo sobre respostas ao estresse hídrico em uma espécie de milho, uma pesquisadora utilizou RNA de interferência (RNAi) para reduzir a expressão do gene ZmDREB2A, um importante regulador transcricional envolvido na resposta fisiológica ao estresse hídrico. Nesse contexto experimental, o uso de scrambled siRNA é essencial porque

Durante a clonagem molecular de um gene de interesse em Escherichia coli, uma pesquisadora preparou células competentes utilizando solução de cloreto de cálcio (CaCl₂) e realizou o processo de transformação por choque térmico, seguido de plaqueamento em meio LB contendo antibiótico. Após incubação, foram observadas colônias em crescimento apenas nas placas contendo o plasmídeo. Considerando os princípios físico-químicos e biológicos envolvidos nessa técnica, é correto afirmar que: