A técnica de antissepsia utilizada na coleta de hemoculturas é a mesma da coleta venosa para exame bioquímicos e hematológicos, não sendo necessário nenhum cuidado ou uso de agente bactericida adicional.

O início da antibioticoterapia antes da coleta das amostras de hemocultura não interfere na taxa de recuperação de microorganismos.

Para cada amostra solicitada deve ser realizada uma punção diferente em sítios anatômicos diferentes (exemplo: 3 amostras = 3 punções).