O esfregaço bacteriano é tratado com reagentes na seguinte ordem: corante púrpura cristal violeta, solução de iodo, álcool e corante vermelho.

O álcool usado na técnica tem como função fixar o corante no interior da célula.

As bactérias Gram negativas são coradas em violeta escuro.

A coloração Gram não permite fazer a distinção entre os principais grupos de microrganismos ou partes de células microbianas.

A coloração de bactérias e outros microrganismos é realizada com uma única solução corante.