O método de gram é o padrão ouro no diagnóstico laboratorial de criptococose.

Bactérias gram positivas apresentam parede celular fina e delgada, por isso não mantêm a coloração do cristal violeta após a descoloração com álcool-cetona.

Na técnica de gram, o lugol desempenha papel de fixador e o álcool-cetona empregado subsequentemente é capaz de descorar as bactérias gram negativas por aumentar a permeabilidade de sua parede celular.

A técnica de Ziehl-Neelsen, utilizada na coloração de bacilos álcool-ácido resistentes, só difere da técnica de gram quanto à aplicação de aquecimento nos corantes.

A ordem de reagentes da coloração de gram inicia com o corante fucsina, seguida de fixação com lugol, descoloração com álcool-cetona e coloração final com cristal violeta.