A metodologia de PCR em Tempo-Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente.

É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo-Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida.

Na metodologia de PCR em Tempo-Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex.

Na metodologia de PCR em Tempo-Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct).

A técnica de PCR em Tempo-Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.