Amostras biológicas devem ser mantidas por aproximadamente 5 min a 0 ºC para que possam ser congeladas de maneira uniforme.

Considerando que a faixa crítica de cristalização da água pura está entre !30 ºC e !140 ºC, a forma de se obter um bom congelamento dessa substância seria fazê-la atravessar a referida faixa de temperatura de modo extremamente rápido, minimizando-se, assim, a formação de cristais de gelo.

Como o ponto de fusão da água é de 0 ºC e o ponto de nucleação homogênea é de !30 ºC, para se evitar a formação de cristais de gelo a amostra deve ser mantida nessa faixa de temperatura até o seu completo congelamento.

Como o ponto de recristalização da água ocorre a -140 ºC, para se evitar a formação de cristais de gelo no material biológico a ser congelado, este deve ser lentamente resfriado até a temperatura mínima de -140 ºC.

O material biológico deve ser mantido a -20 ºC de forma a impedir a formação de cristais de gelo, tendo em vista que o ponto de fusão da água é 0 ºC e o ponto de recristalização, -140 ºC.