Considerando o microscópio eletrônico de transmissão, relacione a COLUNA I com a COLUNA II, associando as terminologias com as respectivas características.

COLUNA I

1. In Focus

2. Overfocus

3. Underfocus

COLUNA II

( ) Ocorrência de franjas de Fresnel pretas e fundo granulado.

( ) Ocorrência de franjas de Fresnel brancas, fundo granulado e contraste aumentado.

( ) Não se observam franjas de Fresnel, há pouca granulação e o contraste é mínimo.

Assinale a sequência correta.

Sobre a técnica de imunocitoquímica para microscopia eletrônica, é incorreto afirmar:

Imunoquímica é o processo para detectar antígenos usando anticorpos direcionados especificamente contra eles e, quando o microscópio eletrônico é usado para detectar a localização de antígenos, essa técnica é usualmente chamada de imunocitoquímica.

Analise as afirmativas a seguir e assinale com V as verdadeiras e, com F, as falsas.

( ) A maioria dos corantes e compostos fluorescentes usados para visualizar imunocomplexos em nível de microscopia óptica pode ser utilizada para microscopia eletrônica, pois são substâncias eletrondensas.

( ) Em condições apropriadas, imunoglobulinas e fragmentos de imunoglobulinas são visíveis no microscópio eletrônico, mas, para o propósito de localização de antígenos, é necessário conjugar os anticorpos com marcadores adequados, já que anticorpos não marcados podem se confundir com coberturas da superfície celular.

( ) O marcador mais conhecido e utilizado para imunocitoquímica é o ouro coloidal.

( ) O ouro coloidal pode ser utilizado conjugado a imunoglobulinas ou a proteína A.

( ) O ouro coloidal pode ser adquirido em diferentes tamanhos (ex. 5 nm, 10 nm, 20 nm) facilmente distinguíveis entre si, o que permite a realização de experimentos de imunocitoquímica com marcações múltiplas.

( ) O ouro coloidal é irreversivelmente ligado aos anticorpos, o que garante a estabilidade dos conjugados ouro-imunoglobulinas, mesmo quando há variações de pH.

Assinale a sequência correta.

Sobre a obtenção de cortes ultrafinos para microscopia eletrônica de transmissão convencional, é incorreto afirmar:

Sabe-se que, em geral, as amostras biológicas possuem baixo contraste ao microscópio eletrônico de transmissão e que, para aumentar o contraste das imagens, é recomendada, na maioria dos casos, a utilização de substâncias contrastantes no preparo das amostras, geralmente sais de metais pesados, através do processo de contrastação.

Sobre as técnicas de contrastação de amostras biológicas, é incorreto afirmar:

Sobre a etapa de ultramicrotomia para microscopia eletrônica, é incorreto afirmar:

Sobre a obtenção de cortes semifinos, é incorreto afirmar:

Sobre a técnica de metalização por pulverização (sputtering), assinale com V as afirmações verdadeiras e, com F, as falsas.

( ) Após a inserção das amostras, a câmara de amostras deve ser evacuada para retirar traços de água e oxigênio, que podem ser quebrados em moléculas reativas capazes de oxidar e danificar a superfície das amostras.

( ) Após evacuação da câmara, a atmosfera é substituída por um gás inerte, que não tem potencial de reagir com a superfície das amostras, como argônio.

( ) O “alvo” é a peça que funciona como a fonte de metais para formação da camada metálica sobre as amostras e pode ter diversas composições, por exemplo: ouro; platina; ligas de ouro/paládio, entre outras.

( ) Aplica-se um campo negativo de alta voltagem na área da câmara, em que o alvo está localizado e as moléculas de gás argônio são ionizadas em Ar+ e elétrons.

( ) As moléculas de Ar+ atingem com força o alvo negativamente carregado, o que promove a ejeção de átomos de metal. Os átomos ejetados eventualmente atingem a superfície das amostras e se acumulam formando um revestimento metálico.

( ) Assim como no processo de metalização por evaporação térmica, as partículas são arremessadas em linha reta sobre a superfície das amostras.

Assinale a sequência correta.

Ciente de que a metalização é uma etapa importante no preparo de amostras biológicas para microscopia eletrônica, assinale a alternativa correta.

Considerando a técnica de secagem em ponto crítico, analise as afirmativas a seguir.

I. É a única técnica de secagem de amostras biológicas em que é possível eliminar a interface líquido/ar, e, com isso, as forças de tensão superficial.

II. Baseia-se no princípio de que um fluido, em condições específicas de temperatura e pressão, apresenta suas fases líquida e de vapor indistinguíveis.

III. É a técnica de secagem mais utilizada, pois é considerada mais segura para a maioria das amostras, no entanto, é um processo longo, podendo levar dias para secagem.

IV. A substituição do solvente por líquido de transição é necessária quando se utiliza amostras que foram desidratadas em série crescente de solvente (geralmente etanol). Para secagem em ponto crítico de amostras hidratadas, essa etapa não é necessária.

V. Durante o processo de secagem, realizam-se as seguintes etapas: inserção das amostras na câmara preenchida com solvente, resfriamento da câmara, substituição completa do solvente por fluido de transição, aquecimento, despressurização até alcançar a pressão atmosférica, retirada das amostras.

VI. O fluido de transição mais utilizado atualmente é o dióxido de carbono; por esse motivo, a técnica é comumente chamada secagem em ponto crítico de CO₂.

Está(ão) correta(s) a(s) afirmativa(s):